Влияние ионного состава растворителя на оптическую плотность смеси пчелиный яд - гепарин

Многочисленными работами сотрудников кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ было показано, что гепарин изменяет физико-химические свойства раствора пчелиного яда, в том числе и оптическую плотность. Однако во всех исследованиях в качестве растворителя исходных веществ применялась дистиллированная вода, которая, естественно, резко отличается по минеральному составу от сыворотки крови. В связи с этим мы в работе использовали основные минеральные-вещества крови: хлористый натрий, калий и кальций.

Исследуемые вещества разводили в дистиллированной воде в следующих концентрациях: пчелиный яд - 1 мг/мл, гепарин - 50 МЕ/мл, минеральные вещества -0,01-1,0%. Оптическую плотность определяли на фотоэлектроколориметре и регистрировали в процентах.

Оптическая плотность раствора смеси пчелиный яд-гепарин в соотношении 1:0,5 соответствовала 31,2 ± 0,1%, причем такое весовое соотношение реагентов давало максимальный эффект. Концентрации гепарина выше или ниже указанных величин при добавлении к 1 мг/мл яда имели меньшую оптическую плотность.

Добавление в растворитель ионов кальция при тех же условиях опыта значительно повышало уровень оптической плотности смеси яд-гепарин. Следует отметить, что повышение оптической плотности наблюдалось во всем диапазоне концентраций ионов кальция (0,01 - 1,0%). однако максимальное изменение отмечалось при концентрации хлористого кальция, соответствующей , 0,1% (88,2 + 0,6%), хотя известно, что в плазме крови содержится 0,01% кальция. При такой концентрации ионов кальция в растворе оптическая плотность соответствовала 43,8 ± 0,7%.

Содержание ионов натрия в растворе колебалось в пределах 0,1 - 1,8%. Максимальная оптическая плотность была зарегистрирована при добавлении хлористого натрия в концентрации 0,8%, что почти соответствует изотоническому физиологическому раствору. В плазме крови содержится чуть менее 0,4% натрия, а в наших модельных опытах эта концентрация давала небольшое увеличение оптической плотности (42,0 ± 1,1%) по сравнению с использованием в качестве растворителя дистиллированной воды (31,2 ± 0,1%).

В плазме крови концентрация калия соответствует 0,0016% Максимальная оптическая плотность в наших экспериментах фиксировалась при содержании ионов калия 0,8% (60,2 ± 1,0%).

Интересно отметить, что соли серебра также активно влияют на процесс комплексообразования пчелиного яда с гепарином. Так, при концентрации азотнокислого серебра 0,13% наблюдается оптическая плотность раствора соответствующая 83,8%, хотя в плазме крови ионы серебра отсутствуют. В следующей серии экспериментов в растворитель добавляли соли натрия (0,4 -1,2%), калия (0,4 - 1,2%) и кальция (0,06 - 0,4%). Оказалось, что максимальная оптическая плотность регистрируется при сочетании концентрации натрий : калий : кальций как 0,8 : 0,8 : 0,1, соответственно, и равна 61,0 ± 4,1%. Аналогичные результаты были получены при определении оптической плотности раствора, в котором в качестве растворителя использовалась сыворотка крови (60.8 ± 0,8%).

В более ранних работах нами было доказано, что пчелиный яд вступает с гепарином в комплексное соединение с образованием нефелометрических структур. Возможно, что увеличение оптической плотности растворов, содержащих смесь яда с гепарином, добавлением минеральных веществ связано с включением ионов в комплекс гепарин - яд.